幾周前，Allogene宣布將在加利福尼亞州紐瓦克建造一個118000平方英尺的細胞治療制造工廠，以支持其Allo CAR-T候選療法產品供應。
同時，Allogene的首席技術官Alison Moore在一份聲明中說道，“建立最先進的制造工廠是我們更快、更可靠、更大規模地提供現成細胞療法的戰略的核心。”
這一消息一經發布，業內關于同種異體CAR-T更是議論紛紛。這討論的熱情稍稍褪去，近日，法國細胞療法公司Cellectis又宣布，將在北卡羅來納州建造一個82,000平方英尺的商業制造工廠，以生產其同種異體CAR-T產品，并已簽署了租賃協議。
據Cellectis稱，計劃建于北卡羅來納州羅利的工廠名為IMPACT，將負責臨床和商業生產。該公司還開始在法國巴黎建造一個14,000平方英尺的工廠，為其UCART產品提供原料供應。
根據美國食品藥品管理局（FDA）和歐洲藥品管理局（EMA）的指導原則，這些新的制造工廠將允許GMP制造臨床和商業產品，并將完全配備以支持監管批準。
之前與許多生物技術公司一樣，Cellectis依靠合同制造商為其UCART產品提供臨床試驗產品和原材料供應。然而，去年該公司決定將制造，這也是細胞療法的關鍵一步，在內部進行。
Cellectis首席執行官André Choulika在3月7日的一份聲明中說到：“現在正是創建自己的供應能力的最佳時機。Cellectis將獲得制造業務的自主權、控制權以及專門知識，使我們能夠繼續建立競爭優勢，并繼續保持在領域中的領先地位。”
Cellectis作為一家走在通用CAR-T研發前沿的公司，已經被業界廣泛熟知和關注。Cellectis的TALEN基因編輯技術和開創性的電轉系統PulseAgile為開發安全有效的下一代免疫療法奠定了基礎。UCART通過TALEN基因編輯技術，敲除TCR等相關基因，避免移植物抗宿主病。
Cellectis公司UCART簡介
UCART制造流程（圖片來源：cellectis.com）
UCART的生產制造
之前對Cellectis的關注點一直放在新療法和臨床試驗進展上，今天我們將看看通用CAR-T生產制造相關的內容。
UCART的生產過程與自體CART大體上類似，不同點在于UCART的原材料是健康捐獻者的血液而非病人自身的血液，其次UCART生產過程中多了一步，引入基因編輯工具敲除某些特定基因。
在目前的自體型CART生產工藝中，Kite的工藝最為簡便，周期也最短，為10天左右；Novartis的生產工藝最為標準，經過后期優化后周期仍有22天；Juno的生產周期在14-18天左右。目前UCART的GMP生產周期大約為19天，其具體過程如下。
UCART GMP生產過程
UCART初始材料：健康捐贈者細胞
首先從健康的美國捐獻者血液中分離單核細胞（MNCs），這些捐獻者血液來自FDA批準的，加利福尼亞州批準的，美國血庫協會（AABB）認可的，臨床試驗標準（CLIA）認證的血庫。
所有的捐獻者都需要經過挑選，篩選（采集前的14天內）和檢測（采集的當天）。所有的人類細胞的捐獻，獲得，檢測，加工和存儲都遵循歐盟和美國的相關法規和指導意見。
從MNCs中分離淋巴細胞（一般的產量大于4x10^9 cells），一次UCART生產的初始細胞數目通常為收集到細胞的1/5-1/3（10^9 cells左右）。
Day1到Day4：第一次T細胞改造（慢病毒感染）
使用識別CD3/CD28的抗體偶聯beads激活T細胞。使用GMP級別的，由第三代慢病毒載體包裝的慢病毒感染激活的T細胞，使得RQR8與相應的CAR在T細胞中表達。
Day5:第二次細胞改造（TALEN介導的基因編輯）
將GMP級別的TALEN編碼的mRNA通過電轉轉入到經過第一次改造的T細胞中，使TALEN瞬時表達。
TALEN能夠識別和切割TRAC與CD52基因組DNA，形成的DNA雙鍵裂斷由非精準的NHEJ修復方式修復從而導致TRAC與CD52基因的敲除。
Day6到Day17：細胞擴增
在可控的培養系統中將細胞擴增到10^11 cells左右。
Day18-19：細胞純化與分裝
使用抗體-磁珠偶聯的beads，分選純化出TCRαβ陰性的T細胞。（此為一個重要的放行標準）
細胞的分裝與凍存。每個產品一般都會有2-3種劑量形式，用以滿足可能的劑量遞增需求。
UCART的QC標準
雖然現在還沒有詳盡的法規來規定CART產品的QC標準，但是CART產品還是需要一系列的質量檢測。其中產品的純度，即≥97%的TCRαβ陰性細胞是一個重要的放行標準。此外產品的無菌性，內毒素，支原體，以及是否含有可復制的慢病毒都需要進行一系列檢測。產品對于目標細胞的響應（包括相關細胞因子的釋放與細胞殺傷活性）也應該被檢測。
UCART的QC標準
同種異體CAR-T相對于自體CAR-T的優勢不必贅述，當然也必然是在有效克服同種異體CAR-T更高挑戰的前提下，如更大的免疫原性風險和排斥反應，編輯效率與細胞毒性的問題等。（生物谷Bioon.com）
http://meeting.bioon.com/2019cell-therapies？__token=liaodefeng
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