| 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)/技術(shù)服務(wù)導(dǎo)航 | |||||||
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| 新藥研發(fā)CRO | |||||||
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酵母雙雜交系統(tǒng)服務(wù) yeast two-hybrid system
酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid system)的建立是基于對(duì)真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程的認(rèn)識(shí)。細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)
錄激活因子的參與。反式轉(zhuǎn)錄激活因子，例如酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4在結(jié)構(gòu)上是組件式的（modular），往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上結(jié)構(gòu)上
可以分開(kāi)，功能上相互立的結(jié)構(gòu)域（domain）構(gòu)成，其中有DNA結(jié)合功能域(DNA binding domain, DNA-BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（
activation domain，DNA-AD）。這兩個(gè)結(jié)合域?qū)⑺鼈兎珠_(kāi)時(shí)仍分別具有功能，但不能激活轉(zhuǎn)錄，只有當(dāng)被分開(kāi)的兩者通過(guò)適當(dāng)?shù)?/p>
途徑在空間上較為接近時(shí)，才能重新呈現(xiàn)完整的GAL4轉(zhuǎn)錄因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence,
UAS）的下游啟動(dòng)子，使啟動(dòng)子下游基因得到轉(zhuǎn)錄。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中，“誘餌”蛋白X克隆至DNA-BD載體中，表達(dá)DNA-BD/X融合蛋白；待測(cè)試蛋白Y克隆至AD載體中，表達(dá)AD/Y融合
蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用，則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近，恢復(fù)行使功能，激活報(bào)告重組體中LacZ和HIS3基因的表達(dá)。
技術(shù)步驟
（1）將待測(cè)基因與Gal4或LexA或其他合適蛋白的DNA結(jié)合域融合構(gòu)建誘餌質(zhì)粒；
（2）將誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化缺乏報(bào)告基因啟動(dòng)子的酵母細(xì)胞株中，選擇被轉(zhuǎn)化的酵母；
（3）再將文庫(kù)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母中；
（4）通過(guò)報(bào)告基因的功能篩選相互作用的蛋白。
應(yīng)用領(lǐng)域
（1）利用酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)的新功能；
（2）利用酵母雙雜交在細(xì)胞體內(nèi)研究抗原和抗體的相互作用；
（3）利用酵母雙雜交篩選藥物的作用位點(diǎn)以及藥物對(duì)蛋白質(zhì)之間相互作用的影響
服務(wù)周期
1) 酵母雙雜交建庫(kù)
為客戶構(gòu)建指定的酵母雙雜交基因文庫(kù)。由客戶提供cDNA 或組織、細(xì)胞。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容包括：總RNA提取、純化，mRNA分離，cDNA制備，cDNA連接AD載體，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌，cDNA文庫(kù)效價(jià)測(cè)定，
cDNA文庫(kù)擴(kuò)增等內(nèi)容。
服務(wù)完成時(shí)提供兩種形式的文庫(kù)：(1)該文庫(kù)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌甘油凍存管；(2)從該文庫(kù)擴(kuò)增的DNA。
周期：2~3個(gè)月。
2) 酵母雙雜交文庫(kù)篩選
為客戶對(duì)指定的基因文庫(kù)進(jìn)行酵母雙雜交篩選。由客戶提供誘餌基因和基因文庫(kù)。
周期：3個(gè)月。篩選完成后向客戶提供詳細(xì)的篩選報(bào)告和陽(yáng)性克隆實(shí)物。
3) 為客戶對(duì)指定的2個(gè)或多個(gè)基因之間進(jìn)行酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)。由客戶提供基因克隆
周期：1個(gè)月。實(shí)驗(yàn)完成后向客戶提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告和相互作用陽(yáng)性的酵母共轉(zhuǎn)化菌株。
服務(wù)咨詢及技術(shù)支持
電話:
Email:SLBY800@163.COM
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