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Western Blot服務-蛋白質免疫印跡技術服務

世聯博研生命科學服務中心推出you勢服務項目－Western Blot服務，該項服務可幫助客戶解決自蛋白提�。ū磉_）至蛋白檢測的各種難題。質you價廉。

收費標準

以每張膜8個樣本收費，不足8個樣本的按8個樣本收費。

注：（6個樣品+陰性對照+陽性對照+marker+內參）/膜

服務范圍

1.如客戶提供組織或細胞樣本，我們會根據樣本的特點，選擇適當的蛋白提取方法提取蛋白，并檢測好蛋白濃度。

2.如客戶需要重組蛋白，我們會根據客戶具體的要求構建表達載體，選擇合適的表達和純化系統為客戶制備重組蛋白（具體參見載體構建服務）。

服務周期

1. 1~2個星期，具體視樣品數量而定。

2.如客戶需表達重組蛋白，服務周期根據其蛋白表達純化的具體情況而定，請來電咨詢。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

1.客戶須在實驗開始前確保其提供材料的數量和質量，并提供相關信息
A.客戶需提供盡量多的樣品（組織：250~500mg或細胞：1×106- 107/樣本）；
B.客戶提供有效的一抗，一抗自備或代購；
C.客戶提供檢測目的蛋白的詳細資料；
D.客戶要確�？贵w的有效性及模型建造的成功性。

2.本公司在收到客戶提供的研究材料后的弟二個工作日起開始實驗。

服務程序

1.可在我公司網站內直接填寫《Western Blot服務訂單》發至我公司郵箱。

2.可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發到我公司。

3.可電話聯系詳談有關具體要求和服務內容。

4.簽訂《Western Blot服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。

5.寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸

,以確保實驗物品的安可靠。

6.實驗結束后，本公司將結果及時發給客戶，同時根據客戶要求處理相關材料

A.實驗結果圖；

B.詳細的實驗步驟和相關數據；

C.完整的實驗報告。

7.客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

服務咨詢及技術支持

·電話:

·Email:SLBY800@163.COM

服務項目簡介

Western blot技術是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳后，經PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載

體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對

應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的弟二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的te異性目的基因表達

的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

應用領域

·可以非常有效的鑒定某一蛋白質（或表位）的性質；

·結合免疫沉淀法，可以用來定量分析小分子抗原；

·表位作圖；

·結構域分析；

·斑點印跡，可用層析組分，蔗糖梯度或脈沖追蹤實驗分析；

·功能實驗中蛋白質復性；

·配基結合，免疫印跡后多種配基可同蛋白質進行配基結合試驗；

·抗體純化；

·由膜上收獲蛋白質條帶制備抗體；

·氨基酸組成分析和序列分析，微量蛋白質（10 pmol）轉移到PVDF膜上或可進行氨基酸組成分析和序列分析。

轉移的蛋白質或多肽條帶可經考馬斯亮藍染色后切下進行氨基酸組成分析或序列分析。

技術步驟

1.蛋白質抽提

2.蛋白質定量

3.變性聚丙烯酰胺電泳（SDS-PAGE）

4.蛋白質轉移到硝酸纖維膜或PVDF膜

5.膜的封閉和抗體的孵育

6.結果檢測

7.數據分析

8.提供實驗報告

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.做組織樣品的western blot的時候，處理樣品有什么訣竅？

必須進行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分步

抽提(超速離心)。還有一點就是組織中的蛋白酶活性更強，需要注意抑制蛋白酶的活性（加入PMSF和蛋白酶抑制劑cocktail），封

閉劑一般5%脫脂奶粉。如果一抗為多克隆抗體，使用BSA也是不錯的選擇。

2.免疫組化和Western blot可以用同一種抗體嗎？

免疫組化時抗體識別的是未經變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構象型；線性表位不受蛋白變

性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構象型表位由于受蛋白空間結構限制，煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋

白上連續的幾個氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時用于免疫組化和Western blotting，而如果抗體識別構象形表位，

則只能用于免疫組化。一般抗體說明書上都有注明此種抗體識別的氨基酸區間。（限于單抗）

3.提供的蛋白樣品是否需濃縮、純化？如何濃縮、純化上清液中的目的蛋白？

按照提供的濃度，如果做Western blot，是不用濃縮樣品的。

4.對小分子蛋白Western blot時需te別注意哪些條件？

對于20kd的小分子的蛋白，Western Blot中要注意的是：

1、轉移時的時間

2、轉移時的電流或電壓

3、transfer buffer 中加20%的甲醇

4、可以用13-15%的分離膠

5.如果我提供組織或細胞，公司提取蛋白跑膠后，剩下的樣品蛋白裂解液可以給我一份嗎？

可以。

6.顯影結果是否有原始膠片可以提供？

根據不同的顯影方式來判斷是否提供。