| 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)/技術(shù)服務(wù)導(dǎo)航 | |||||||||
|
|||||||||
|
|||||||||
| 新藥研發(fā)CRO | |||||||||
|
|||||||||
|
|||||||||
單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析服務(wù) (PCR-SSCP)
單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析服務(wù) (PCR-SSCP)
世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析服務(wù)(PCR-SSCP)。PCR-SSCP分析技術(shù)是一種DNA單鏈凝膠電泳技術(shù)，它根據(jù)形成不
同構(gòu)象的等長(zhǎng)DNA單鏈在中性聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率變化來(lái)檢測(cè)基因變異。該技術(shù)已被廣泛用于癌基因和抗癌基因變異的檢
測(cè)、遺傳病的致病基因分析以及基因診斷、基因制圖等領(lǐng)域。世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心將會(huì)為您在單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析服務(wù)方面提供方位，性價(jià)
比高的解決方案。
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
詳情請(qǐng)來(lái)電咨詢
服務(wù)周期
我公司在接受實(shí)驗(yàn)委托1~2周內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)并交付實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
客戶須知（對(duì)材料的要求、注意事項(xiàng)）
- 客戶提供靶DNA，請(qǐng)?zhí)峁〥NA樣品電泳圖，并保證DNA樣品的有效性；客戶也可以提供含靶DNA的組織或細(xì)胞，需提供足量的新鮮樣品（DNA提取費(fèi)用另計(jì)）。
- 核酸片段的大小: 用于SSCP分析的核酸片段越小，檢測(cè)的敏感性越高。對(duì)于<200 bp的片段，SSCP可發(fā)現(xiàn)其中70％的變異；對(duì)于300 bp左右的片段則只能發(fā)現(xiàn)其中50％的變異；而＞500 bp的片段，則僅能檢出10％~30％的變異，因此，<300bp，尤其是150 bp左右的核酸片段更適于SSCP分析。對(duì)于大于400bp的PCR產(chǎn)物就需要設(shè)法進(jìn)一步處理，可以用限制性酶消化PCR產(chǎn)物，產(chǎn)生小于400 bp的DNA片段，再進(jìn)行SSCP分析。
-
游離引物: 游離引物可能同PCR產(chǎn)物結(jié)合而改變其泳動(dòng)率，即使游離引物量為6 nM都有明顯影響。因此，應(yīng)盡可能除去游離引物。
可以采用不對(duì)稱引物擴(kuò)增方法，盡可能消耗多余的引物。也可以運(yùn)用過(guò)柱或磁性球方法純化PCR產(chǎn)物。
或者是稀釋PCR產(chǎn)物，減少游離引物的干擾。
-
假陰性: 一般認(rèn)為，如沒(méi)有污染，PCR－SSCP分析不存在假陽(yáng)性結(jié)果，但可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果，
后者是由于點(diǎn)突變引起的空間構(gòu)象變化甚微，遷移率相差無(wú)幾所致，尤其是點(diǎn)突變發(fā)生在擴(kuò)增片段的兩端時(shí)。
如果有陽(yáng)性和陰性對(duì)照，結(jié)果可以重復(fù)確定的突變帶是可信的，如果沒(méi)有陽(yáng)性對(duì)照，應(yīng)經(jīng)測(cè)序來(lái)確定其是否為突變帶。
由于PCR－SSCP的不足之處主要是可能檢出假陰性結(jié)果。應(yīng)通過(guò)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，摸索電泳條件，假陰性結(jié)果在很大程度上是
可以避免的。但對(duì)未知基因變異的檢測(cè)，假陰性結(jié)果則難以完消除。
服務(wù)程序
1.可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《單鏈構(gòu)象多態(tài)性服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。
2.可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。
3.可電話聯(lián)系詳談?dòng)嘘P(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。
4. 簽訂《單鏈構(gòu)象多態(tài)性服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。
5. 寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：
- 具體實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器，電泳圖片以及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等，實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以電子或書面形式提交給您。
7. 客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
服務(wù)咨詢及技術(shù)支持
·電話:
·Email:SLBY800@163.COM
服務(wù)項(xiàng)目簡(jiǎn)介
單鏈DNA段呈復(fù)雜的空間折疊構(gòu)象，這種立體結(jié)構(gòu)主要是由其內(nèi)部堿基配對(duì)等分子內(nèi)相互作用力來(lái)維持的，當(dāng)有一個(gè)堿基發(fā)生改變時(shí)
，會(huì)影響其空間構(gòu)象，使構(gòu)象發(fā)生改變。空間構(gòu)象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯酰胺凝膠中受排阻程度不同，因此，通過(guò)非變性聚
丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，可以非常敏銳地將構(gòu)象上有差異的分子分離開。該方法即為單鏈構(gòu)象多態(tài)性(Single-Strand
Conformation Polymorphism，SSCP)分析。PCR-SSCP分析的基本程序?yàn)椋菏窒萈CR擴(kuò)增te定靶序列，然后將擴(kuò)增產(chǎn)物變性為單鏈
，進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。
技術(shù)步驟
1.PCR擴(kuò)增靶DNA;
2.將te異的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物變性，而后快速?gòu)?fù)性，使之成為具有一定空間結(jié)構(gòu)的單鏈DNA分子;
3.將適量的單鏈DNA進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;
4.后通過(guò)放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯色分析結(jié)果。若發(fā)現(xiàn)單鏈DNA帶遷移率與正常對(duì)照的相比發(fā)生改變，就可以判定該鏈構(gòu)
象發(fā)生改變，進(jìn)而推斷該DNA段中有堿基突變。
應(yīng)用領(lǐng)域
廣泛用于癌基因和抗癌基因變異的檢測(cè)、遺傳病的致病基因分析以及基因診斷、基因制圖等領(lǐng)域。
應(yīng)用實(shí)例
FAQ（Frequently Asked Questions）
1. 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析有什么作用？
廣泛用于癌基因和抗癌基因變異的檢測(cè)、遺傳病的致病基因分析以及基因診斷、基因制圖等領(lǐng)域。
2. 在單鏈構(gòu)象多態(tài)性實(shí)驗(yàn)中，如何設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，如果不存在陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信嗎？
實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照一般選用正常細(xì)胞或菌株DNA的PCR擴(kuò)增條帶，而陽(yáng)性對(duì)照則是采用已知突變的正常細(xì)胞或菌株，如果不存在陽(yáng)性對(duì)照，一般會(huì)應(yīng)用測(cè)序來(lái)確定其是否為突變帶。
.png)