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好使用新鮮的樣品或取樣后立即在液氮中冷凍保存的樣品，避免反復凍融，因為會導致提取的DNA片段較小且提取量下降。樣品運輸要求在低溫下進行，一般采用保溫性較好的容器，如泡沫塑料盒、保溫瓶等，并且在容器中加入足夠量的液氮或干冰，徹底封存好容器。要注意保存管的密封性，標記不易脫落，附上樣品的描述和實驗方案。RNA 樣品保存在70%的乙醇和0.1 M醋酸鈉中低溫運輸。

服務程序

1. 可在我公司網站內直接填寫《DNA/RNA提取服務訂單》發至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發到我公司。

3. 可電話聯系詳談有關具體要求和服務內容。

4. 簽訂《DNA/RNA提取服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安可靠。

6. 實驗結束后，本公司將結果及時發給客戶，同時根據客戶要求處理相關材料：實驗報告、抽提產物及電泳圖片。

7. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

服務咨詢及技術支持

·電話:

·Email:SLBY800@163.COM

RNA提取

TRIZOL法

樣本來源：血液、組織、培養的細胞，糞便、口腔粘膜、唾液、石蠟包埋組織、血痕等。

每1 mg組織或1×106培養細胞預期的RNA產量：
1. 肝和脾，6~10 μg
2. 腎，3~4 μg
3. 骨骼肌和腦組織，1~1.5 μg
4. 胎盤，1~4 μg
5. 上皮細胞(1×106 cultured cells)，8~15 μg
6. 纖維母細胞(1×106 cultured cells)，5~7 μg

技術流程：
1. 勻漿化作用
2. 分離階段
3. RNA的沉淀
4. RNA的洗脫
5. RNA的再溶解
6. RNA的保存

TRIzol法抽提總RNA流程：

組織100 mg
↓
加1 ml TRIzol
↓
勻漿（要徹底，后轉至EP管）
（組織勻漿量>100 mg時分裝1 ml/每EP管）
↓
顛倒混勻10下，室溫5分鐘（30 °C孵育）
↓
加氯仿1/5體積（0.2 ml）（必須按總體積的1/5）
↓
顛倒混勻15 s，室溫2~5分鐘（30 °C孵育）
↓
4 ℃，離心12000 g，15分鐘
↓
轉上層水相（約400 μl）于另一1.5 ml EP管中
↓
加等體積異丙醇（約400 -500 μl），混勻室溫10分鐘
↓
4 ℃，離心12000 g，10分鐘（30 °C孵育）
↓
棄上清
↓
加冰預冷的75%乙醇（用DEPC水配）1ml
↓
4 ℃離心7500 g，5分鐘
↓
棄上清，空氣干燥5~10分鐘（不能完干燥）
↓
溶于DEPC水中至20 μl（10 μl~20 μl）
（可在55~60 ℃水中，10分鐘助溶）

DNA抽提

技術原理:

核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。按照RNA 分離操作方案在完移去水樣層后，勻漿中的DNA 存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來。在沉淀和多次洗脫后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。

用途：

從組織和培養細胞中抽提的DNA 可以用來做樣品中DNA 含量的測定, 通過PCR擴增DNA。同時抽提的基因組DNA 可以用于對Northern analysis的結果進行標準化，因為DNA 變異程度比總RNA 或組織重量要小。

技術流程：
1. DNA 的沉淀
2. DNA 的洗脫
3. DNA 的再溶解
4. DNA的保存。

5. DNA的定量及預期的產量
每mg組織或1×106培養細胞預期的DNA產量：
1）肝和腎，3~4 μg
2）骨骼肌，腦組織，和胎盤，2~3 μg
3）培養的人，大鼠，小鼠細胞(1×106)，5~7 μg
4）纖維母細胞，5~7 μg

載體質粒(carrier vector)的抽提、純化及檢測

（一）試劑盒抽提法

技術原理：

DNA雙鏈與硅化材料相互作用的原理是DNA分子中磷酸二酯鍵在較低pH 值和高鹽濃度環境下脫水，使得暴露的磷酸基團吸附硅膠。雙鏈的DNA分子一旦被硅膠吸附，則以天然狀態或部分變性狀態存在，不能用洗脫RNA或碳水化合物等生物大分子的溶劑（如70％乙醇）將其洗脫下來。但是，經過水溶性緩沖液（通常為TE或水）重新水化后，DNA 就能從層析柱上定量回收。

技術流程：
1. 大腸桿菌接種，活化菌株。
2. 菌株培養過夜。
3. 收集細胞。
5. 懸浮細菌沉淀。
6. DNA質粒抽提、純化和過柱。
7. 洗脫質粒DNA。
8. 保存。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.提取的RNA降解，原因有哪些？怎樣避免？

RNA酶是RNA降解的主要原因，RNA酶是一類生物活性非常穩定的酶，除細胞內RNA酶外，環境中的灰塵、各種實驗器皿和試劑、人類皮膚的汗液、唾液中均存在RNA酶，且RNA酶耐熱、耐酸堿，煮沸也不能使之完失活，蛋白變性劑可使之暫時失活，但變性劑去除后，又可恢復活性。所以在RNA提取過程中必須避免外源性RNA酶的污染和抑制內源性RNA酶的活性。

（1）去除外源性的RNA酶污染

實驗過程必須戴手套操作，ALL溶液和水均需加0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯，是RNA酶的強抑制劑）室溫攪拌過夜，然后高壓處理，玻璃器皿洗凈后在250攝氏度烘烤4小時。塑料器材好使用滅菌的一次性用品等。

（2）抑制內源性的RNA酶的活性

細胞破碎時，RNA酶釋放出來，所以力爭在RNA提取的初始階段，通過加入RNA酶抑制劑來抑制內源性的RNA酶的活性。總之，RNA降解的原因很多，操作時一定要小心。

2.te殊組織價格另議，什么組織被你們公司認為是te殊組織？價格會比一般組織貴多少？

植物葉、花等te殊組織，具體價格請來電詢價。

3.能否告知公司是用什么具體方法提取DNA或RNA的？

公司一般采取DNA或RNA抽提試劑盒來提取。

4.如果是抽提質粒，提出來的質粒純度能達到轉染級別嗎？

我們抽提出來的質粒均進行純化，質粒抽提分為小提、中提、大提三類，大提可以達到要求，具體看您需要做什么實驗。

5.造成OD260 /OD280比值低有哪些原因？如何解決？

（1）蛋白質污染：確保不要吸入中間層及有機相。減少起始樣品量，確保裂解完、徹底。加入氯仿后手先要使勁混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。解決辦法是用氯仿重新抽提一次，再沉淀、溶解。（2）設備限制：測定OD260 及OD280 數值時，要使OD260 讀數在0.10 -0.50之間。此范圍線性好。（3）用水稀釋樣品：測OD 時，對照及樣品稀釋液請使用10 mM Tris（pH 7.5）。用水作為稀釋液將導致比值的降低。

6.如何解決提取的RNA不溶現象？

（1）75%乙醇清洗沉淀后不要干燥時間過長或加熱干燥。

（2）可以于60 ℃加熱5 min后再于冰上溶解數小時。

（3）RNA沉淀中含有不溶的蛋白質混合物時，應注意吸取上清液時，不要讓槍頭接觸蛋白層。

（4）溶解液更換為0.5%的SDS溶液（DEPC處理水配制）。

7.提取的RNA中含有DNA污染怎么解決？

(1) 裂解組織或細胞使用的變性劑量偏少，加大變性劑的用量。

(2) 使用的組織材料中含有大量的有機溶劑（如：乙醇、異丙醇等)、高濃度的Buffer、堿性溶劑等，在組織研磨中應盡量研磨仔細，直至研磨成粉末。

(3) 可以使用DNA酶消化處理去除DNA。

8.提取后的DNA或RNA以什么形式運輸給我？RNA可以反轉錄成DNA嗎？質量報告是什么形式的（OD值或者其他）？基因組完整性（如基因組片段基本無斷裂）如何確保？

DNA以干粉的形式提供, RNA一般反轉錄為cDNA提供。質量報告以OD值+電泳圖的形式提供。您可通過電泳圖片來判定基因片段的完整性。

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