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DNA ladder檢測服務
服務項目簡介
細胞核染色質DNA斷裂是細胞凋亡的標志特征。在細胞發生凋亡時，核酸內切酶被激活，選擇性降解染色質DNA，形成50-300 kb的大片段，并進而在核小體連接處斷裂，形成180-200 bp或其整倍數的DNA片段，這些DNA片段可從細胞中提取出來，通過瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色呈現為梯狀條帶（DNA Ladder），并據此判斷細胞凋亡產生。
技術步驟
1. 離心收集105~106細胞（1500×g，5min）于1.5mL微量離心管中；用PBS洗滌細胞兩次（離心1500×g，5min），棄上清；
2. 沉淀的細胞中加入100 μL Lysis Buffer，渦旋振蕩器上劇烈混合10秒，離心1000×g，5min，移上清于另一1.5mL微量離心管中；
3. 沉淀再加入100μL Lysis Buffer重復上步，合并兩次的上清液；
4. 在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A，55℃反應1小時；
5. 加入20μL Enzyme B，37℃，1小時；
6. 加入130μL Precipitant和950μL冷乙醇， 混勻，置-20℃，1小時以上或過夜；
7. 4℃，12, 000~14, 000 rpm離心15~30min，小心地棄去上清，收集沉淀的DNA；
8. 加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12, 000~14, 000 rpm離心20min；棄上清，DNA沉淀于室溫干燥10 min后，加入10~15μL TE Buffer，充分攪拌溶解DNA；
9. 取上述10~15μL樣品加入2~3μL Loading Buffer，1.5%瓊脂糖凝膠電泳（凝膠和電泳緩沖液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶），5V/cm電泳1小時，紫外燈下觀察并拍照。
應用實例
細胞凋亡檢測
服務周期
我公司在正式接受實驗委托1~2周左右完成實驗并交付實驗結果。
服務咨詢及技術支持
電話:
Email: slby800@163.com
