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腺相關病毒載體構建服務

服務項目簡介

腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是簡單的非致病性單鏈DNA病毒，需要輔助病毒參與生活周期，輔助病毒通常為腺病毒（Ad）或者單純皰疹病毒（HSV）。基因組兩端為末端反向重復序列（ITR），中間基因組編碼兩個蛋白：Cap和Rep。ITRs對于病毒的復制和包裝具有決定性作用。Cap蛋白為病毒衣殼蛋白，Rep蛋白參與病毒的復制和整合。AAV能感染多種細胞。Rep蛋白存在時，病毒基因組很容易整合到人類弟19號染色體的te異位點：AAVS1位點。這是已知的能夠定點整合的哺乳動物DNA病毒。

重組腺相關病毒載體（rAAV）源于非致病的野生型腺相關病毒，由于其安性好、宿主細胞范圍廣（分裂和非分裂細胞）、免疫源性低，在體內表達外源基因時間長等特點，被視為有前途的基因轉移載體之一，在世界范圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。經過十幾年的研究，重組腺相關病毒的生物學特性已被深入了解，尤其是其在各種細胞、組織和體內實驗中的應用效果方面已經積累了許多資料。在醫學研究中，rAAV被用于多種疾病的基因治療的研究（包括體內、體外實驗）；同時作為一種有特點的基因轉移載體，還廣泛用于基因功能研究、構建疾病模型、制備基因敲除鼠等方面。目前已發現的AAV至少有十幾種血清型，它們主要區別在衣殼蛋白Cap的不同，因此導致各種血清型AAV對不同的組織和細胞的不同感染效率。

AAV選擇的條件

1. 治療基因的長度不能過大。AAV的總容量4.7kb，還要包括AAV自身的ITR，啟動區和RNA加尾信號；

2. 基因需要持續表達，蛋白可以是分泌型，也可以是非分泌型；

3. 長期表達目的基因，沒毒副作用；

4. 不需要目的基因立刻表達；

5. 不需要基因高水平表達；

6. AAV載體對靶細胞具有較高的轉導效率。

AAV病毒的感染細胞

AAV載體對于骨骼肌、視網膜、肝細胞、心臟平滑肌細胞、神經元細胞、胰島B細胞、關節滑膜細胞等具有良好的感染效果，而對于淋巴細胞、造血干細胞、神經膠質細胞、成纖維細胞等感染效果較差。

病毒的加樣量

病毒量為105-106V.P/Cell時佳。如果太低，基本檢測不出，低加病毒量為104V.P/Cell，才能檢出目的蛋白的表達。

病毒要求

本公司向客戶提供三種rAAV載體--rAAV2、rAAV2/1載體的構建、擴增及純化服務，包括了從實驗設計到載體包裝、生產、純化、質量檢定、分裝等的一系列服務。為基礎研究、臨床前研究和早期臨床研究提供高滴度、高純度的rAAV載體。其中的對照病毒為攜帶GFP、LacZ和Luc標記。

除了AAV2和AAV2/1之外，我們也提供AAV1、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9等。具體情況請電話咨詢本公司技術支持。

重組基因的啟動子：mCMV、hCMV、PGK、CAG、HRE-miniCMV、hEF1α、AFP（大鼠）等。其中，CAG啟動子為肝臟te異啟動子。

病毒級別

實驗室級別：適用于細胞實驗、動物試驗研究；
臨床試驗用級別：適用于藥物開發、臨床前研究、臨床樣品申報、臨床試驗等。

合同完成周期：

在完成載體構建的前提下，合同時間簽訂為80個工作日左右；