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腺病毒載體服務

服務項目簡介

腺病毒（Adenovirus）是目前高效可靠的重組病毒表達系統之一，可用于在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白。其具備以下you點：

1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動物細胞，除可感染幾乎ALL人的細胞類型外，還可感染大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種細胞。
2. 因腺病毒的感染不依賴細胞周期，故其既可以感染增殖細胞也可以感染非增殖細胞。
3. 腺病毒具有嗜上皮細胞特性，因目前大多數腫瘤細胞均屬于上皮細胞，這使得腺病毒非常適合應用于基因治療領域。
4. 腺病毒滴度高，可用于動物水平的實驗。
5. 有較好的生物安性。腺病毒攜帶的基因不會整合到宿主細胞基因組中；實驗中雖然會有一定機率出現RCA（即復制型腺病毒），但由于大多數成人體內都有針對腺病毒的抗體，一般情況下，危險性不是很高。

技術路線

（一）常用腺病毒載體的包裝方法（包括病毒E1、E3缺陷）：

1. 經典的同源重組法（雙質粒共轉染）：原理是HEK293細胞內同源重組。

2. Ad-Easy法：通過同源臂重組的方式在細菌中獲得重組腺病毒基因組質粒。

3. AdMax包裝系統：通過Cre/loxP獲得重組病毒，這個過程發生在HEK293細胞中，將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質粒共轉染HEK293細胞，利用Cre/loxP系統的作用實現重組，產生重組腺病毒。

4. Ad5/F35MaxTM包裝系統： Ad5/F35是Ad5的病毒纖突（Fiber）被改造成35型腺病毒纖突的嵌合型腺病毒載體。對各種造血細胞和腫瘤細胞的感染效率高于普通Ad5、外源基因表達量更多，包裝系統高效且穩定，是目前方便快捷的腺病毒（Ad5/F35）包裝系統。

5. Ad5/F11包裝系統：Ad5/F11是Ad5的病毒fiber改造成為11型腺病毒的Fiber，te別針對血液細胞的感染，彌補Ad5的不足。

（二）構建步驟：

1. 腺病毒載體構建：將目的基因連入穿梭質粒；

2. 病毒包裝、擴增：
（1）將鑒定正確的基因克隆到慢病毒載體，與輔助載體一起轉染293T細胞進行包裝；
（2）將包裝好的病毒超速離心收集；
（3）將濃縮病毒進行滴定（TCID50法），滴定結果單位為IU/mL（一般為1011-1013IU/ml以上，根據客戶需要，不同量有價格差異）

3. 質量控制與鑒定：
（1）測序鑒定；
（2）根據te定引物作RT-PCR鑒定；
（3）蛋白表達鑒定（根據客戶要求并由客戶提供高te異性抗體）

4. 技術步驟

構建步驟

（1）將外源基因構建至穿梭載體上。
（2）將穿梭載體與腺病毒骨架載體進行LR體外重組。
（3）將重組成功的腺病毒載體線性化，轉染至HEK293細胞中，包裝腺病毒。
（4）將獲得的腺病毒感染HEK293細胞，繼續擴增，以獲得更多的腺病毒。
（5）收獲腺病毒，提取其基因組DNA，進行PCR鑒定，以確定所得腺病毒的正確性。

服務內容

（1）表達shRNA用重組腺病毒包裝。
（2）基因過表達用重組腺病毒包裝。

應用領域

基因治療，基因組學，RNAi等。

服務周期

總計需要50-70個工作日內，得到1011-1013VP的高純度病毒。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

（1）大插入片段5kb-8Kb，插入片段的長度不同，技術難度也不同；

（2）本公司提供的病毒量為≥109；

（3）提供詳盡、完整的實驗報告。

附：腺病毒和慢病毒比較表

服務咨詢及技術支持

電話:

Email:slby800@163.com