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蛋白質(zhì)原核表達(dá)技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)原核表達(dá)技術(shù)服務(wù)

世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供高質(zhì)量的原核蛋白表達(dá)服務(wù)。世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心已建立整套的基因克隆與表達(dá)體系，無論是單個(gè)基因的克隆、表達(dá)與純化，還是多個(gè)基因高通量的基因克隆、表達(dá)和純化，均能選用適合您試驗(yàn)（科研項(xiàng)目）需要的表達(dá)系統(tǒng)和合適的表達(dá)載體為您提供you質(zhì)的服務(wù)。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)及服務(wù)周期

2500元/1mg，10mg以內(nèi)每增加1mg加入1000元成本費(fèi)。2-4周（帶標(biāo)簽）

3500元/1mg，10mg以內(nèi)每增加1mg加入1500元成本費(fèi)。4-6周（不帶標(biāo)簽）

服務(wù)內(nèi)容

1.客戶可提供必要的資料及以下任意一種方式：

⑵提供經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證的目的PCR產(chǎn)物或模板，由我們?yōu)槟�克隆在相�?yīng)的載體上（基因克隆費(fèi)用另計(jì)）；

⑶提供相關(guān)資料及核酸／蛋白序列，由我們利用生物信息學(xué)的方法進(jìn)行分析處理后提出具體可行的實(shí)驗(yàn)方案并付諸實(shí)現(xiàn)（基因合成及亞克隆費(fèi)用另計(jì)）。

2.目的基因亞克隆：我們可以提供多種原核表達(dá)載體，以滿足不同的實(shí)驗(yàn)要求。我們提供構(gòu)建好的質(zhì)粒、（相應(yīng)的）菌株及測(cè)序報(bào)告。（參見原核表達(dá)載體構(gòu)建服務(wù)）

3.我們還可以應(yīng)客戶的要求進(jìn)行原核表達(dá)蛋白的大量表達(dá)與純化。

服務(wù)程序

1.可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《蛋白質(zhì)原核表達(dá)服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2.可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3.可電話聯(lián)系詳談?dòng)嘘P(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4.簽訂《蛋白質(zhì)原核表達(dá)服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。

5.寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：

b、Western blot檢測(cè)結(jié)果

c、you化的蛋白純化條件

d、純化蛋白

e、實(shí)驗(yàn)流程及結(jié)果

7.客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

電話:

Email:slby800@163.com

實(shí)驗(yàn)原理

1、E . coli表達(dá)系統(tǒng)

E . coli是重要的原核表達(dá)體系。在重組基因轉(zhuǎn)化入E . coli菌株以后，通過溫度的控制，誘導(dǎo)其在宿主菌內(nèi)表達(dá)目的蛋白質(zhì)，將表達(dá)樣品進(jìn)行SDS-PAGE以檢測(cè)表達(dá)蛋白質(zhì)。
2、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)
提高外源基因表達(dá)水平的基本手段之一，就是將宿主菌的生長(zhǎng)與外源基因的表達(dá)分成兩個(gè)階段，以減輕宿主菌的負(fù)荷。常用的有溫度誘導(dǎo)和藥物誘導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)采用異丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）誘導(dǎo)外源基因表達(dá)。不同的表達(dá)質(zhì)粒表達(dá)方法并不完相同，因啟動(dòng)子不同，誘導(dǎo)表達(dá)要根據(jù)具體情況而定。

實(shí)驗(yàn)流程

大腸桿菌和酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.大腸桿菌蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)中需要注意的事項(xiàng)？

（1）ALL操作盡量在冰上操作，以避免蛋白質(zhì)發(fā)生變性；

（2）根據(jù)自己的需要選擇不同的表達(dá)載體，并注意不同的表達(dá)載體上的融合標(biāo)簽和攜帶的抗性基因，其中有些標(biāo)簽是可以去除的。

（3）構(gòu)建好的載體好進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，保證讀碼框正確，即沒有移碼。

（4）長(zhǎng)期保存的pET重組子在高濃度甘油中會(huì)導(dǎo)致質(zhì)粒不穩(wěn)定。

（5）37 ℃生長(zhǎng)常常會(huì)使一些蛋白累積形成包涵體，而30 ℃生長(zhǎng)則可能產(chǎn)生可溶的和有活性的蛋白。在某些情況下，低溫（15－20℃）延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間可以使溶解性蛋白的產(chǎn)量達(dá)到大。

（6）進(jìn)行SDS-PAGE分析時(shí)，需you化電泳上樣體積。

2.我需要表達(dá)某蛋白，用于制備多（單）克隆抗體的制備，是采用真核表達(dá)還是原核表達(dá)好？

采用原核表達(dá)就夠了。