| 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)/技術(shù)服務(wù)導(dǎo)航 | |||||||||
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免疫沉淀服務(wù)(IP)
服務(wù)項(xiàng)目簡介
在細(xì)胞生物學(xué)研究中，有些靶蛋白表達(dá)水平不高，難以用免疫印跡的方法檢測到。為此可用te異性識別靶蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀
，純化和富集靶抗原。免疫 沉淀可以從可溶性分子的復(fù)雜混合物中純化te定的抗原，通常為蛋白質(zhì)。免疫沉淀常用于測量蛋白質(zhì)抗
原的相對分子質(zhì)量，監(jiān)控其翻譯后修飾，研究蛋白質(zhì)的半衰期 等。
技術(shù)步驟
①離心收集細(xì)胞，PBS洗滌2次。細(xì)胞用量根據(jù)目的蛋白表達(dá)的水平而定。
②按1×107細(xì)胞/mL加入細(xì)胞裂解液，于冰浴上超聲破碎。
③4℃，12,000 g離心10 min，取上清。
④上清中加入50 μL 的蛋白A/G-agarose,于4 ℃在搖床上溫和搖1-3 h，進(jìn)行預(yù)清除。
⑤12,000 g離心30 s，取上清。
⑥將上清等分2份，補(bǔ)加稀釋液至1 mL，其中一份加入1-10 μg識別目的蛋白的抗體，另一份加入等量的對照抗體，于4℃在搖床上
溫和搖2 h，然后加入50 μL 的蛋白A/G-agarose,于4℃在搖床上溫和搖過夜。
⑦離心棄上清，清洗沉淀4次。
⑧Western blot進(jìn)行定性和定量檢測。
應(yīng)用實(shí)例
1．未免疫沉淀富集過的樣品
2．抗體免疫沉淀富集過的樣品
服務(wù)周期
我公司在接受實(shí)驗(yàn)委托2~3周內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)并交付實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
客戶須知
需提供te異性一抗及其來源說明。
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