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流式細胞術檢測服務(FACS)
流式細胞術檢測（FACS）服務
世聯博研生命科學服務中心提供流式細胞術檢測（FACS）服務。流式細胞術（flow cytometry, FCM)是一種可以對細胞或亞細胞結構進行快速測量的新型分析技術和分選技術。其特點是①測量速度快；②可進行多參數測量；③是一門綜合性的高科技方法（ 流式細胞術綜合了光學，電子學，流體力學，細胞化學，免疫學，激光和計算機等多門學科和技術）；④既是細胞分析技術，又是精確的分選技術。
服務內容
(1)細胞周期細胞；(2)細胞凋亡；(3)免疫細胞分型；(4)表面抗原鑒定；(5)細胞內鈣離子檢測；(6)線粒體功能；(7)細胞分選。
服務價格及周期
服務項目 |
樣品處理 |
應用的試劑 |
收費 |
細胞周期 |
細胞——胰酶消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定過夜 （不超過一周） |
RNA酶，PI染料 |
<10個樣品，80元/個 >10個樣品，60元/個 試劑費已包括。 |
細胞凋亡 |
新鮮培養的細胞 |
Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒 |
<10個樣品，150元/樣品 >10個樣品，120元/樣品 已包括試劑費用，客戶提供試劑可減20元，另需細胞培養費用。 |
免疫細胞分型 |
培養的細胞：如白血病細胞，客戶刺激好的細胞、抗凝血、脾勻漿 |
破膜劑，固定劑，刺激劑、te異性抗體（需客戶提供） |
雙染： <10個樣品，120元/樣品 >10個樣品，100元/樣品 三染：在原來基礎上加30元 需要分離細胞、培養、刺激的具體情況另記 |
表面抗原鑒定 |
培養的細胞 |
te異性抗體（需客戶提供） |
單染： <10個樣品，80元/樣品 >10個樣品，60元/樣品 雙染：在原來基礎上加30元 三染：在原來基礎上加30元 |
細胞內鈣離子檢測 |
培養的細胞 |
Fluo-3 AM(鈣離子熒光探針) |
<10個樣品，100元/樣 >10個樣品，80元/樣品（已包含試劑） |
線粒體功能 |
僅適用于懸浮或貼壁培養的新鮮細胞 |
客戶提供試劑盒 |
檢測費可同細胞周期 |
細胞分選 |
收費：標記費用+分選儀使用費用價格體系類似于共聚焦 |
我公司在正式接受實驗委托1~2周左右交付實驗結果。所提供的實驗結果忠實于樣本的實際情況。
客戶須知
1、細胞數量達到檢測所需（細胞周期1x106、細胞凋亡3x106），生長良好，無污染，附有細胞生長照片，注明實驗檢測項目所需試劑盒。
2、外周血：EDTA或肝素抗凝血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、試劑：部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供；te殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，我公司可以代購；用戶所提供抗體應可與樣本發生te異性識別反應。
4、樣品包裝要求：細胞培養在培養瓶中或操作前樣本于合適的條件保存。
服務程序
1. 可在我公司網站內直接填寫《流式細胞術檢測（FACS）服務訂單》發至我公司郵箱。
2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發到我公司。
3. 可電話聯系詳談有關具體要求和服務內容。
4. 簽訂《流式細胞術檢測（FACS）服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。
5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安可靠。
6. 實驗結束后，本公司將以下結果及時發給客戶，同時根據客戶要求處理相關材料：
·實驗方法、步驟、所用試劑、儀器等。
·流式實驗數據。
7. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。
·電話:
·Email:SLBY800@163.COM
附：流式細胞術檢測樣品制備方法：
A. 直接標記抗體（FITC標記抗體）：
(1) 收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
B. 未標記抗體間接免疫熒光標記法：
（1）收集2×106個細胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次，800rpm離心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細胞，800rpm離心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
（4）加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結合一抗，重復一次。
（5）加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。
（7）流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
（1）待測樣本制成單細胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。
（2）用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。
（3）調整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
（4）PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
注：本方法僅供參考，如有其它要求，請在送樣前說明。
技術步驟
① 樣品制備：培養細胞或新鮮組織制成單細胞懸液
② 熒光標記：直接或間接標記
③ 上機檢測
應用實例：
① 直接標記抗體（FITC標記抗體）
② 未標記抗體間接免疫熒光標記
③ 細胞周期，細胞凋亡及DNA多倍體分析（PI染色）
應用領域
① 細胞表面標志的檢測
② 細胞內和體液中細胞因子的測定
③ DNA含量及DNA倍體分析
④ 細胞凋亡分析
FAQ（Frequently Asked Questions）
1. 可否由我提供細胞和處理的藥物，你們按照我的要求處理后直接做流式？價格怎么算？
可以.價格另計.具體參看是何種實驗.具體請來電咨詢.
2. 我有31個樣品細胞周期的9個,免疫細胞分型雙染的8個,三染的14個,能否給點you惠.
按各個不同實驗的價格算,但可以在總價上給部分you惠(來電詢問).
3. 請問貴公司FACS流式檢測采用的是什么儀器？
BD流式儀
4. 流式檢測送檢樣品有什么要求？
各個實驗有不同的要求,請來電詢問.
5. 實驗結果，如圖片，能夠符合高水平雜志發表文章的要求嗎？如果達不到怎么辦？
本公司只提供原始數據,配套儀器及軟件所呈現出來的圖片,如需數據分析,價格另計.
實時熒光定量PCR技術服務:自己設計方案,我們設計的方案中間可能會有問題,
6. 你們公司采用的是什么儀器，如何確保實驗結果的穩定與可靠性。
ABI 7300
我們的實驗都是由專業技術人員操作,基本可以排除人員因素; 實驗前需要測驗樣品,如樣品不達標,則無法進行該實驗.
7. 探針法和染料法有什么區別嗎，哪種方法的定量效果更好？
探針法,探針是te異性的,染料無te異性.
8. 絕對定量與相對定量有什么區別，一般發表的論文用的是什么定量方法？
相對定量的結果只是給出一個大致的數量比;而絕對定量的結果呈現的是一個具體的數量值.一般論文采用相對定量方法.
9. 是否有REAL-TIME PCR引物合成服務，客戶需要提供哪些信息？
1）生物種 (Human、Mouse、Rat、Cow、Dog、Chicken)。
2）目的基因信息 (GenBank Acc、Gene ID、關鍵詞)。
