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隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)服務 世聯(lián)博研生命科研服務中心提供隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)服務。運用隨機引物擴增尋找多態(tài)性DNA片段可作為分子標記。這種方法即為 RAPD(Random amplified polymorphic DNA，隨機擴增的多態(tài)性DNA)。盡管RAPD技術誕生的時間很短，但由于其te的檢測DNA多 態(tài)性的方式以及快速、簡便的特點，使這個技術已滲透于基因組研究的各個方面。 收費標準 DNA提取：60/樣品 隨機引物合成：<100條 12元/條；100-500條 9元/條；501-1000條 7元/條；>1000條 5元/條 RAPD： <8個樣 100元/樣；8-50個樣 80元/樣；>50個樣 詢價 服務周期 我公司在接受實驗委托1~2周內(nèi)完成實驗并交付實驗報告。 客戶須知（對材料的要求、注意事項）
服務程序 1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《隨機擴增多態(tài)性DNA服務訂單》發(fā)至我公司郵箱。 2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。 3. 可電話聯(lián)系詳談有關具體要求和服務內(nèi)容。 4. 簽訂《隨機擴增多態(tài)性DNA服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。 5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安可靠。 6. 實驗結束后，本公司將結果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關材料：
7. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。 服務咨詢及技術支持 ·電話: ·Email:SLBY800@163.COM 服務項目簡介 RAPD技術建立于PCR技術基礎上，它是利用一系列(通常數(shù)百個)不同的隨機排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈(通常為十聚體)為引物， 對所研究基因組DNA進行PCR擴增聚丙烯酰胺或瓊脂糖電泳分離，經(jīng)染色或放射性自顯影來檢測擴增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性。 這些擴增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性反映了基因組相應區(qū)域的DNA多態(tài)性。RAPD所用的一系列引物DNA序列各不相同， 但對于任一te異的引物，它同基因組DNA序列有其te異的結合位點，這些te異的結合位點在基因組某些區(qū)域內(nèi)的 分布如符合PCR擴增反應的條件，即引物在模板的兩條鏈上有互補位置，且引物3'端相距在一定的長度范圍之內(nèi)， 就可擴增出DNA片段。因此如果基因組在這些區(qū)域發(fā)生DNA片段插入、缺失或堿基突變就可能導致這些te定結合位點 分布發(fā)生相應的變化，而使PCR產(chǎn)物增加、缺少或發(fā)生分子量的改變。通過對PCR產(chǎn)物檢測即可檢出基因組DNA的多態(tài)性。 分析時可用的引物數(shù)很大，雖然對每一個引物而言其檢測基因組DNA多態(tài)性的區(qū)域是有限的，但是利用一系列引物則可 以使檢測區(qū)域幾乎覆蓋整個基因組。因此RAPD可以對整個基因組DNA進行多態(tài)性檢測。另外 ，RAPD片段克隆后可作為RFLP的分子標記進行作圖分析。 該技術具有以下的you越性：所需DNA 樣品少，但對純度要求很高；能直接對基因組進行檢測； 不需要先預設計探針和對基因組進行測序；不需要Southern 雜交、銀染等復雜步驟；操作安； 不需用同位素示蹤；對人一般不構成危害。 技術步驟 一、 材料 不同來源的DNA(50 ng/ul)。 二、設備 PCR儀，PCR管或硅化的0.2 ml eppendorf管，電泳裝置。 三、試劑 1、隨機引物(10 mer) (5 μmol/L) 2、Taq酶 3、10xPCR 緩沖液 4、MgCl2：25 mmol/L 5、dNTP：每種2.5 mmol/L 四、操作步驟： 1. 在25 μl反應體系中,加入 模板DNA 1 μl (50 ng) 隨機引物 1 μl (約5 pmol) 10×PCR Buffer 2.5 μl MgCl2 2 μl dNTP 2 μl Taq酶 1單位（U） 加ddH2O 至 25 μl 混勻稍離心，加一滴礦物油。 2. 在加熱至90℃以上的PCR儀中預變性94 ℃ 2分鐘, 然后循環(huán): 94 ℃ 1分鐘，36 ℃ 1分鐘，72 ℃ 1分鐘，共40輪循環(huán)。 3. 循環(huán)結束后, 72 ℃ 10分鐘，4℃保存。 4. 取PCR產(chǎn)物15 μl加3 μl上樣緩沖液(6×)于2% 瓊脂糖膠上電泳, 穩(wěn)壓50~100 Ｖ（電壓低帶型整齊，分辨率高）。 5. 電泳結束，觀察、拍照。 FAQ（Frequently Asked Questions） 1. 隨機引物的長度一般是多少？ 隨機引物一般是8-10堿基的寡核苷酸引物。 2. 如何選擇隨機引物？ 可以查詢相關文獻，看看文獻報道采用的是什么引物，一般來說，合適的引物都是通過大量篩選得到的。隨機引物的篩選要遵守以下原則： （1）產(chǎn)物的DNA條帶清晰可見； （2）在分析的樣品之間存在有較高的多態(tài)性； （3）產(chǎn)生多態(tài)性DNA條帶具有可重復性。 3. 貴公司說隨機擴增多態(tài)性DNA對DNA的純度要求很高，DNA的純度一般要達到什么水平？ 一般測OD值，若A260/A230>=2.0; A260/A280>=1.8 即表明純度達到要求。 4. RAPD與PCR技術相比的you缺點？ ①不使用同位素，減少了對工作人員健康的危害； ②可以在物種沒有任何分子生物學研究的情況下分析其DNA多態(tài)性； ③對模板DNA的純度要求不高； ④技術簡單，無需克隆DNA探針，無需進行分子雜交； ⑤靈敏度高，可提供豐富的多態(tài)性； ⑥RAPD引物沒有嚴格的種屬界限，同一套引物可以應用于任何一種生物的研究，因而具有廣泛性、通用性。 但是，RAPD技術較易受到各種因素的影響。無論是模板的質(zhì)量和濃度，短的引物序列，PCR的循環(huán)次數(shù)，基因組DNA的復雜性，技術 設備等，都有可能是RAPD技術重復性差的直接原因。目前，多從以下幾個方面來提高反應的穩(wěn)定性： ①操作規(guī)范，反應體系的組成要力求一致，盡可能地使RAPD反應標準化； ②提高擴增片段的分辨率； ③將RAPD標記轉(zhuǎn)化為SCAR標記后再進行常規(guī)的PCR分析，可以提高反應的穩(wěn)定性及可靠性。 5. RAPD主要運用在哪些方面？ 目前，RAPD標記已被廣泛應用于分子生藥學各方面： ①生物多樣性：隨著植物藥研究的不斷深入，可持續(xù)開發(fā)利用藥用植物資源的問題越來越受到重視。應用RAPD技術進行藥用植物生 物多樣性研究，可以在遺傳多樣性水平上了解天然產(chǎn)物多樣性與物種、生態(tài)及地理分布的關系，挖掘潛在的藥物資源，為開發(fā)新藥 尋找途徑。RAPD方法可以檢測物種的遺傳多樣性，探討物種的親緣關系和進化趨勢。因此它是藥用植物資源保護和種質(zhì)資源保存的 依據(jù)，te別是對瀕危物種的研究更具有實際意義。 ②RAPD標記可用于生藥分類，在DNA分子水平上鑒別生物不同種、亞種、變種甚至株。 ③RAPD標記可用來制作生物類生藥系統(tǒng)發(fā)育關系上的樹狀圖，te別是種內(nèi)水平。這為生藥親緣進化關系,尋找新的藥用資源開辟了新途徑。 ④RAPD標記可用于構建基因圖譜，進行基因定位，和對未知序列的DNA片段擴增與測序。 ⑤RAPD標記亦可用于遺傳連鎖圖譜的構建，指導藥用植物育種，防止品種間雜化和自交，選育you良性狀的品種。
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