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Annexin V/PI檢測服務服務項目簡介 在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側,細胞發生凋亡早期,膜磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。 Annexin V是一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合 。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。在細胞發生凋亡時,膜磷脂酰絲氨酸外翻的發生早于細胞核的變化,而 此時Propidium Iodide(PI)不能通過細胞膜。 細胞壞死時,雖然也會發生磷脂酰絲氨酸外翻,但此時細胞膜的通透性明顯增加,PI等核酸染料進入細胞與細胞核中的核酸結合, 發出紅色熒光。所以Annexin V-FITC(綠色熒光)常與鑒定細胞死活的核酸染料(如PI)合并使用,來區分凋亡細胞與死亡細胞。 技術原理及步驟
1. 離心收集細胞,微量離心機轉速1000 rpm,離心時間5 min,棄培養基。 2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。 3. 用400 μL1× Binding Buffer懸浮細胞,濃度大約為1×106 cells/mL。 4. 在細胞懸浮液中加入5 μlLAnnexin V-FITC,輕輕混勻后于2~8°C避光條件下孵育15min。 5. 加入10 μL PI后輕輕混勻于2~8°C避光條件下孵育5 min。 6. 在1小時內用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。 應用實例
應用領域 細胞的早期凋亡及區分凋亡與壞死細胞 服務周期 我公司在正式接受實驗委托2個星期左右完成實驗并提供實驗報告。 客戶須知(對材料的要求、注意事項) 需提供細胞類型,處理條件。 服務咨詢及技術支持
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